22、国内外学者动物实验、流行病学调查、临床病例研，证实草甘膦“致畸”
-- 阿根廷国立科学技术研究委员会等机构团队2018年6月研究证实，怀孕母鼠F0（母代）从妊娠第9天到断奶期间食用含草甘膦残留饲料，而且后代不再食用含草甘膦残留饲料情况下，能够跨代造成雌性孙代“胎儿发育迟缓和先天性结构异常”畸形，而子代中没有发现这种情况。
-- 这充分证实，对草甘膦除草剂、阿特拉津（莠去津）除草剂与所有化学农药、对所有化学成分“食品添加剂”、对“食盐加碘酸钾”、对食品加工中使用的与食品接触的所有化学物质（例如“化学浸出”食用油萃取剂正己烷、塑化剂），以及对所有转基因农产品及其加工的转基因食品的“食用安全性”，都必须进行至少四代长期、多代毒理学动物试验，才可能发现与评估其跨代遗传毒理学作用。
联署支持签名邮箱：lianshuqianming@163.com
概述
一、结论、理由与依据（简述）
1）世界粮农组织/世界卫生组织农药残留专家组联合会议（JMPR）1994年文件证实“草甘膦大鼠致畸”试验造成“胸骨骨化的减少”【证据01】
2）贵阳医学院农药毒理研究组学者1982年发表毒理学研确认“草甘膦对小白鼠的致畸試验”揭示“草甘膦原药”致畸：“胸骨骨化匹缓数较高”【证据02】
3）国外学者9项动物试验研究证实草甘膦“致畸”：“骨头畸形、未骨化”、“颅面和口腔畸形、眼部异常”、“骨化不完全和囟门增大”、“引起人类细胞周期功能异常”、“驼背，脊柱侧弯”、“骨头畸形、独眼畸形、颅面畸形”、“尾巴畸形”、“心房和心室的结构异常”、“头部异常、肠道异常、心脏水肿”。【证据03-11】
4）丹麦养猪场饲料草甘膦残留与新生猪仔畸形密切相关：“脊柱和颅骨变形、头和腿部萎缩中的颅骨孔”、“带睾丸的雌性小猪”、“前肠和后肠未连接”、“颅骨、脊柱和腿畸形”。【证据12-证据14】
5）美国、阿根廷、巴拉圭学者7项流行病学调查确认高浓度草甘膦环境暴露与先天性畸形异常发生率剧增相关：“神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂”、“母亲直接或间接接触农药的儿童中约有40％出生时患有某种畸形”、“1991年先天性先天缺陷发生率为16.2%， 2003年达到37.1％”、“生殖器异常，四个肢体异常，肾脏和泌尿系统异常，消化系统异常，心脏疾病和胆道闭锁、唇裂和甲状腺舌囊肿”、“心脏房间隔缺损（ASD），动脉导管未闭（PDA），发育不良左心综合征（HLHS），气管食道瘘管（TEF），肥厚性幽门狭窄（HPS），先天性巨结肠症，尿道下裂，上肢和下肢缺陷以及胸膜闭锁”。【证据15-证据21】
6）法国暴露草甘膦除草剂造成一个家庭两个新生儿畸形病例：“一个是生长激素缺乏症、肛门无孔和信中房间隔缺损。另一个患尿道下裂、小阴茎、生长激素完全缺乏和肛门无孔”【证据22-证据23】
7）2010年以来，美国华盛顿州Yakima县、Benton县与Franklin县新生儿无脑症发生率（超过美国其他地区4倍以上）与草甘膦密切相关【证据24-27】
8）阿根廷国立科学技术研究委员会等机构团队2018年6月研究证实，怀孕母鼠F0（母代）从妊娠第9天到断奶期间食用含草甘膦残留饲料，而且后代不再食用含草甘膦残留饲料情况下，能够跨代造成雌性孙代“胎儿发育迟缓和先天性结构异常”畸形，而子代中没有发现这种情况。【证据28】
9）《自然杂志 - 科学报告》2019年4月发表华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心团队研究进一步证实：“草甘膦可以诱导疾病和生殖系（如精子）的代际遗传。观察表明，在后代的疾病病因学中必须考虑草甘膦的跨代遗传毒理学”【证据29】
10）华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心团队的研究证实：不仅草甘膦除草剂有这样的跨代毒理学作用，除草剂阿特拉津（莠去津）、杀虫剂（如农药氯菊酯）杀菌剂（烯菌酮、免克宁、灰霉利）、塑料衍生化合物（如双酚A）、塑化剂（如邻苯二甲酸酯）、DDT等也有类似的跨代遗传毒理学作用【证据29】
11）这充分证实，对草甘膦除草剂、阿特拉津（莠去津）除草剂与所有化学农药、对所有化学成分“食品添加剂”、对“食盐加碘酸钾”、对食品加工中使用的与食品接触的所有化学物质（例如“化学浸出”食用油萃取剂正己烷、塑化剂），以及对所有转基因农产品及其加工的转基因食品的“食用安全性”，都必须进行至少四代长期、多代毒理学动物试验，才可能发现与评估其跨代遗传毒理学作用。
二、理由与依据（详述）
1、世界粮农组织/世界卫生组织农药残留专家组联合会议（JMPR）1994年文件证实“草甘膦大鼠致畸”试验造成“胸骨骨化的减少”
世界粮农组织食物与环境中农药残留专家组与世界卫生组织农药残留专家组联合会议（JMPR）1994年《对化学安全性国际计划环境健康标准159：草甘膦》【证据01】
7.5.1 致畸研究
在妊娠第6-19天，每天以0、300、1000和3500 mg/kg体重的剂量通过管饲法向怀孕的Charles River COBS CD大鼠施用草甘膦原药（Glyphosate technical）。3500 mg/kg剂量组观察到以下效果：软便、腹泻、呼吸窘迫、鼻涕红、活动减少、死亡率增加（处理结束前死亡6/25孕鼠）、生长迟缓、增加早期吸收的发生率、植入总数和活胎儿总数的减少、胎儿数量的增加以及胸骨骨化的减少。在较低剂量水平下，没有这些作用。 这项研究中的未观察到负面作用水平（NOAEL）为每天1000 mg/kg体重（IRDC，1980b）。
在荷兰belted兔中，从妊娠第6-27天每天服用0、75、175和350 mg/kg体重（通过管饲法）剂量草甘膦进行测试。在孕鼠中，大剂量组腹泻和软便的发生率增加，中等剂量组也有所增加。仅高剂量组鼻分泌物的发生率增加。在研究过程中，中剂量组和高剂量组中分别有2个和10个孕鼠因未知原因死亡。 这项研究中的未观察到负面作用水平（NOAEL）为每天175 mg / kg体重（IRDC，1980c）。
Environmental Health Criteria 159 : Glyphosate, International Programme on Chemical Safety, By Group of Experts of United Nations Environment Programme, International Labour Organization, and World Health Organization,
Published by World Health Organization, Geneva,1994
http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc159.htm#SectionNumber:7.3
2、中国学者1982年“草甘膦对小白鼠的致畸試验”揭示“草甘膦原药”致畸：“胸骨骨化匹缓数较高”
《贵阳医学院学报》1982年3月发表贵阳医学院农药毒理研究组《除草剂“草甘膦”毒性研究资料【证据05】
《草甘膦对小白鼠的致畸試验（摘要）
组织胚胎学教研室:覃国芳、姜障蓉、许庭良、梁文妹
目前关于有机磷农药能导致实验动物妊娠障碍的报道屡见不鲜。为判断草甘麟的胚胎毒作用和有无致畸作用，我们进行本实验。
试验用药：由省化工研究所提供含有效成份 96.6% 的纯品，为白色粉末状物质，实验时用精制淀粉配成不同浓度的混悬液。
采用2月龄昆明小白鼠，雌雄按2 : 1交配，取有阴栓母鼠100只随机分为五组：草甘麟三个剤量组（分别为80，420，1050mg/kg）,阴性对照组（蒸馏水）及阳性对照组（六六六80 mg/kg），每组20只，于器官发生期（妊娠第6~14天）灌胃， 给药体积为2ml/kg...
结果，草甘麟三个剂量组的母鼠体重增长数、活胎数、死胎数、吸收胎数及胎长均与对照组相接近，着床数则高于对照组，仅420mg/kg组胎重略低（P<0.05），第五节胸骨骨化匹缓数较高（P<0.01）与对照组有显著差异。内脏检査未见畸形。外形检查，草甘麟80mg/kg组及阴性对照组各出现1例6趾胎鼠。
朱延韦、蒋宪瑤，除草剂“草甘膦”毒性研究资料，贵阳医学院学报，1982(3)
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-GYYB198203006.htm
3、国外学者动物试验研究证实草甘膦除草剂配方制剂“致畸”：“骨头畸形、未骨化”、“颅面和口腔畸形、眼部异常”、“骨化不完全和囟门增大”、“引起人类细胞周期功能异常”、“驼背，脊柱侧弯”、“骨头畸形、独眼畸形、颅面畸形”、“尾巴畸形”、“心房和心室的结构异常”、“头部异常、肠道异常、心脏水肿”。
3-1 《毒理学通讯》2003年4月发表巴西Rio Grande do Sul联邦大学（(UFRGS）圣保罗大教堂药理学系、巴西Parana联邦大学生物科学研究所药理学系Eliane Dallegrave et al.《草甘膦除草剂农达（Roundup）对Wistar大鼠的致畸潜力》【证据03】
这项研究的目的是评估在巴西商业化的除草剂草甘膦（Roundup）对Wistar大鼠的致畸性。从怀孕的第6天到第15天，用水或500、750或1000 mg / kg草甘膦对孕鼠进行口服处理。在怀孕的第21天剖腹产，并记录黄体数、着床部位，活着的和死亡的胎儿以及吸收。确定胎儿的体重和性别，并检查胎儿的外部畸形和骨骼变化。拆除孕鼠的器官并称重。结果表明，用1000 mg / kg草甘膦处理的孕鼠死亡率为50％。在对照组、500、750和1000 mg / kg草甘膦组中，分别观察到15.4%、33.1%、42.0%和57.3％的胎儿有骨骼改变。我们可能得出的结论是，草甘膦-农达对孕鼠有毒并诱导胎儿骨骼发育迟缓。...
3.2 胎儿变量
对照组的胎儿雄:雌性别比为0.94:1，接受草甘膦500、750和1000 mg / kg的组雄:雌性别比分别为1.06:1、1.01:1和1.5:1。...
仅两个草甘膦组显示胎儿具有外部畸形，低剂量组（500 mg / kg）的比率为2.0％，中剂量组（750 mg / kg）的比率为0.6％。除750 mg / kg组中的一只胎儿在怀孕开始时停止发育且未被吸收外，大多数动物都显示全身性水肿（anasarca）。...
关于骨骼变化的总百分比，暴露于草甘膦除草剂农达的处理组与对照组相比有显着差异（PB / 0.001，x2-检验）。对照组和500、750和1000 mg / kg草甘膦组的胎儿发生改变的百分比分别为15.4%、33.1%、42.0%和57.3%。观察到最常见的骨骼改变是不完整的骨骼骨化和囟门增大（表3），与对照组相比，在实验组中发生的频率更高（PB / 0.001，x2-test）。
对照组中0.6％动物出现肋骨畸形、肋骨未骨化和股骨短，但在草甘膦处理组中未观察到。
在500mg / kg的草甘膦处理组中，不完全骨化和二侧胸骨的发生率较高。 仅在这一组中发现肱骨不完全骨化和骨融合（分别为2.7％和0.7％）。
某些骨骼改变仅发生在750 mg / kg草甘膦处理过的孕鼠的胎儿中。 胸骨畸形的发生率为11.7％（PB / 0.001，x2-检验，与其他组相比），回肠弯曲和前爪指骨发育不良的发生率分别为2.5％和1.9％（P = 0.05，x2- 测试）。在1.2％的动物中观察到顶壁骨化、枕骨和颈椎不完全骨化、下颌骨短、肋骨融合和锁骨弯曲（P = 0.05，x2-检验）。发生颧缘畸形、颈椎不齐或哑铃状椎骨、波浪状胸骨、锁骨不规则、锁骨畸形、肩骨畸形，尺骨/干双骨骨化不完全、掌骨未骨化和股骨弯曲，发生率为0.6％（P = 0.05，x2-test） 。
在1000 mg / kg草甘膦处理组中，有1.3％的胎儿出现了颈椎和胸椎等畸形（P = 0.05，x2-test），但在其他任何组中均未观察到。
表3列出了在本研究中分析的两个或多个组中发生的骨骼变化的百分比。 在500和750 mg / kg草甘膦组中，两壁间壁和未骨化后指骨的发生率明显更高（与对照组相比，P = 0.001，x2检验）。 在750和1000 mg / kg草甘膦组中，鳞状骨化不完全和尾椎骨缺失更为常见（与对照组相比，P = 0.001，x2-test）。......
讨论
... 根据WHO（1994）列举的研究，从怀孕的第六天到第19天，每天向怀孕的Charles River COBS CD大鼠施用相当于每天3500 mg / kg草甘膦原药的剂量水平，从而导致软便、腹泻、嘎嘎声呼吸、红色鼻涕和活动减少、孕鼠死亡率增加（在治疗期间为24％）、发育迟缓、早期吸收的发生率增加、植入和存活胎儿的总数减少以及胸骨骨化减少的胎儿数量增加（WHO, 1994）。尽管尚不清楚其确切的毒性机理，但众所周知，孕鼠在孕期暴露于农用化学品（如草甘膦）会在孕鼠及其胎儿的肝脏酶，以及心脏和大脑中引起多种功能异常（Daruich et al., 2001）。
在这项研究中观察到的母体毒性表明，由Adam等人确定，在巴西商业出售的农达制剂比草甘膦原药更具毒性（Adam et al., 1997; Dallegrave et al., 2002）。两项研究均表明，商业制剂中存在的表面活性剂比草甘膦具有更高的毒性。世卫组织的报告尽管提到某些生殖性迹象，如早期吸收、减少的植入位点和活胎数量减少与暴露于3500 mg / kg草甘膦原药相关，但在本研究中，在暴露于草甘膦商业制剂1000 mg / kg时未观察到这些生殖性影响。这可能是因为草甘膦商业制剂中的其他成分直接影响了孕鼠的系统器官，所以在1000 mg / kg的草甘膦中未显示出生殖性作用。但是，在所有草甘膦除草剂农达暴露组中观察到胎儿出现骨骼改变的频率显着增加，表明这些改变与母体毒性没有直接关系，其影响可能与胎儿骨骼发育有关。
本研究报道的骨骼发育迟缓表明，草甘膦除草剂农达的作用比草甘膦原药的作用更明显（WHO, 1994）。... 正如Williams等人报道的那样（Williams et al. 2000），尽管事实表明该研究中使用的剂量在正常情况下也永远不会对应于人体暴露水平，与成年或儿童暴露的草甘膦和聚氧乙烯胺水平（接触边际分别为5420、3370和461 577），该结果表明，商业制剂对大鼠骨骼系统的潜在风险增加。为了更好地理解这一事实，应该进行额外的研究以确定商业制剂对胎儿骨骼系统的作用机理，因为人类也可能接触这种商业制剂。
ElianeDallegraveet al., The teratogenic potential of the herbicide glyphosate-Roundup® in Wistar rats. Toxicology Letters, 30 April 2003; 142(1-2) p45-52
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378427402004836
3-2 《环境污染毒理学学报》2003年3月发表阿根廷国立湖泊研究所、阿根廷Ciudad大学生物化学与生物学学院卫生高中、阿根廷自然科学与土地测量学院R. C. Lajmanovichet al《暴露于草甘膦制剂的Scinax nasicus蝌蚪的致死率和畸形》【证据04】
这项研究的目的是在实验室条件下，研究商业草甘膦制剂（GLY-F）在阿根廷S. Nascus蝌蚪中的存活和幼虫畸形的急性毒性。...
被测产品为除草剂GLYFOS，含48％草甘膦异丙胺盐和惰性成分表面活性剂POEA（聚氧乙胺）的商业配方（ESP 2001）。 在该项急性毒性存活试验中，使用的浓度为：3.07、3.84、4.8、6和7.5 mg 草甘膦除草剂/L。 ...
结果和讨论
在草甘膦除草剂为3.07 mg/ L的情况下，48小时的死亡率比对照组低，但不显着（图1）。 在3.84至7.5 mg/L范围内，在48小时的存活率较低。在所有浓度下96小时均检测到死亡率升高。 96小时LC50比24小时LC50低1.8倍，表明延长暴露时间时草甘膦除草剂毒性增加（表1）。根据Pauli和Berril的研究（Pauli and Berril, 1996），低浓度的草甘膦除草剂会引起蝌蚪的毒性，从而模仿典型的农业应用后地表水中可能出现的浓度。
在本研究中，使用草甘膦除草剂处理的蝌蚪的48小时LC50为3.62 mg/L。
在所有测试中均发生幼虫发育不良（颅面和口腔畸形、眼部异常和弯曲的尾巴弯曲）（图2），并随着时间和草甘膦除草剂浓度的升高而增加。将这些影响合并到所有外部畸形百分比中，并列于表2。在暴露于3.07 mg / L草甘膦除草剂一天的情况下，畸形很小，而在7.5 mg / L的草甘膦除草剂水平下，畸形几率大于90％。这项测试证实了草甘膦除草剂对蝌蚪的畸形影响。
R. C. Lajmanovichet al., Induction of Mortality and Malformation in Scinax nasicusTadpoles Exposed to Glyphosate Formulations. Bull. Environ. Contam. Toxicol. March 2003; 70:612–618
https://link.springer.com/article/10.1007/s00128-003-0029-x
3-3 《毒理学通讯》2003年4月发表巴西南Rio Grande do Sul州联邦大学（UFRGS）健康基础科学研究所药理学系、巴西Parana联邦大学理工学院生物科学研究所药理学系ElianeDallegraveet al.《草甘膦除草剂农达（Roundup）在Wister大鼠中的致畸潜力》【证据05】
这项研究的目的是评估草甘膦除草剂农达（Roundup®）（在巴西商业化）对Wistar大鼠的致畸性。从怀孕的第6天到第15天，用水或500、750或1000 mg / kg草甘膦对大坝进行口服处理。在怀孕的第21天进行剖腹产...检查胎儿的外部畸形和骨骼变化。...
在500、750和1000 mg / kg草甘膦对照组的的胎儿中观察到骨骼改变分别为15.4％，33.1％，42.0％和57.3％。
仅两个草甘膦组显示胎儿具有外部畸形，低剂量组（500 mg / kg）的发生率为2.0％，中剂量组（750 mg / kg）的发生率为0.6％。...
观察到的最常见的骨骼改变是颅骨骨化不完全和囟门增大（表3），与对照组相比，在实验组中发生的频率更高（P B / 0.001，x2-test）。
在500 mg / kg的草甘膦组中，不完全骨化和二部分胸骨的发生率较高； 仅在该组中观察到肱骨不完全骨化和颧骨融合（分别为2.7％和0.7％）。...
我们可以结论，草甘膦除草剂农达（Roundup®）对胎儿有毒并诱导胎儿骨骼发育迟缓。
ElianeDallegraveet al., The teratogenic potential of the herbicide glyphosate-Roundup® in Wistar rats. Toxicology Letters, 30 April 2003; 142(1-2) p45-52
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378427402004836
3-4 《细胞生物学》2004年4月发表法国国家科学研究中心细胞周期与发育Roscoff生物站、法国皮埃尔和玛丽居里大学Julie Marcet al.《草甘膦除草剂影响细胞周期调制》【证据06】
细胞周期失调是肿瘤细胞和人类癌症的标志。细胞周期检查点的失败会导致基因组不稳定，并从最初受影响的细胞中继发癌症。全球使用的草甘膦作为活性剂的Roundup 3plus除草剂产品引起人类细胞周期功能异常，这是根据人类对海胆胚胎的第一个细胞分裂的分析判断得出的，引起了对于草甘膦除草剂对人类健康影响的关注。
由于诸如癌症之类的细胞周期疾病是由独特细胞的功能障碍导致的（Molinari, 2000; Stewart et al., 2003），因此评估影响细胞的草甘膦的阈值剂量引起了人们的兴趣。 从草甘膦除草剂Amega、Cosmic和Cargly制剂诱导细胞周期紊乱的浓度约为1 mM，农达（Roundup）制剂的诱导浓度为8-12 mM，当存在于Amega，Cosmic和Cargly中时，足以引起至少一个细胞功能障碍的草甘膦的不利剂量阈值估计为10 µM；当存在于农达Biovert制剂（Roundup Biovert）或农达3plus（Roundup 3plus）中时，足以引起至少一个细胞功能障碍的草甘膦的不利剂量阈值估计为80-120 µM。
由于制造商建议以40 mM的草甘膦浓度喷洒制剂产品，因此喷雾液滴中存在的产品浓度比对细胞周期的不利浓度阈值高500至4000倍。
Julie Marcet al., Glyphosate‐based pesticides affect cell cycle regulation.
Biology of the cell. April 2004; 96(3) p245-249
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1016/j.biolcel.2003.11.010
3-5 《国际农业与生物学杂志》2010年9月发表斯里兰卡Peradeniya大学动物学系和科学研究所、化学系；印度海得拉巴国际水管理研究所Jayawardena UA团队《农药对沙漏树蛙（Polypedates cruciger）急性和慢性暴露的的毒性》【证据07】
在实验室条件下，研究了四种常见的农业农药，即毒死蜱、乐果、草甘膦和敌稗对沙漏树蛙急性和慢性暴露的畸形的存活、生长和发育的直接影响。
草甘膦除草剂（Roundup®或Glyphosate®）溶解于水中后（例如，对于椰子种植园1.44 kg/公顷）施用。...
长期接触生态相关浓度农药：孵化后五天的蝌蚪（Gosner阶段25-26；Gosner, 1960）... 接触生态相关浓度的农药。...乐果，草甘膦和敌稗的浓度系列分别为0.25、0.50、0.75和1.00 ppm，这是根据相关研究检测的井水...以及农药登记处的信息有关水井水中草甘膦浓度的最新信息。 ...
蝌蚪孵化后10天（Gosner阶段27），孵化后30天（Gosner阶段31）和进化变态时记录了畸形。
长期暴露于生态相关剂量下的存活百分比低于对照组（草甘膦=75％，乐果=77.5％，毒死蜱=80％和敌稗=85％，对照=95.5％），而且浓度显着影响。
暴露的蝌蚪要花更多的时间才能进化，并且大小比对照组的蝌蚪要小得多。它们还出现了高频率的畸形（草甘膦= 69％，乐果= 64％，毒死蜱 = 60％，敌稗= 45％）。 畸形主要是驼背，脊柱侧弯（弯曲），皮肤溃疡和水肿。
这项研究提供了关于农药对斯里兰卡特有两栖动物物种影响的比较研究的第一个经验证据，并强调了调查淡水生态系统中化学农药水平及其对非目标生物的影响的重要性。
Jayawardena UAet al., Toxicity of agrochemicals to common hourglass tree frog (Polypedates cruciger) in acute and chronic exposure. Int J of Ag and Biology. Sep 2010. 12(5):1560-853012
https://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=PK2011000179
3-6 《毒理学化学研究》2010年10月发表阿根廷布宜诺斯艾利斯大学医学院胚胎分子学实验室Paganelli, A. Carrascoet A.E al.《草甘膦基除草剂通过损伤损害视黄酸信号对脊椎动物造成畸形影响》【证据08】
我们在这里表明，用1/5000稀释的草甘膦除草剂制剂（相当于430 μM草甘膦）亚致死剂量处理的非洲爪蟾和鸡胚或单独注射草甘膦的青蛙胚胎（每个胚胎注射8至12 μM）足以诱发可再现的畸形。经草甘膦除草剂处理或用草甘膦注射的青蛙胚胎表现出非常相似的表型，包括躯干头缩短的缩短、头颅变小、小眼、独眼畸形、在神经期的神经嵴区缩小以及蝌蚪期的颅面畸形。
... 总之，尽管并非完全相同，但草甘膦除草剂制剂处理和单独草甘膦注射后的胚胎表现出相同的表型。商业制剂中的佐剂存在则可以解释其中的差异。综上所述，这些结果表明，草甘膦除草剂和单独草甘膦均会在诱导和分离过程中损害神经元分化、菱形形成以及神经嵴的形态。
Paganelli, A.CarrascoetA.Eal., Glyphosate- based herbicides
produce teratogenic effects on vertebrates by impairing retionic acid signaling.
Chemical Research in Toxicology, 2010. 23, 1586-1595.
http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/tx1001749
3-7 《生态应用》2012年3月（发表美国匹兹堡大学生物科学教授，匹兹堡生态谐调实验室主任Rick A. Relyea《草甘膦除草剂对于脊椎动物新的作用：捕食者动物减少除草剂死亡率；除草剂诱发抗捕食者动物形态》【证据09】
我使用室外的中观空间，创建了一个简单的湿地社区，其中包含叶子凋落物、藻类、浮游动物和三个品种蛙（木蛙（Rana sylvatica或Lithobates sylvaticus]，豹蛙[R. pipiens或L. pipiens]和美洲蟾蜍[Bufo americanus或Anaxyrus americanus]）。
我使这个社区接触到与环境相关的草甘膦除草剂农达（Roundup Original MAX的0、1、2或3 mg酸当量[ae] / L酸）的因子组合，并与三种捕食者-线索处理（无捕食者，成年蝾螈 [Notophthalmus viridescens]或幼虫蜻蜓[Anax junius]）。...
更惊人的发现是草甘膦除草剂农达诱导了蝌蚪的形态变化。在木蛙和豹蛙蝌蚪中，草甘膦除草剂农达在与蜻蜓提示引起的适应性变化相同的方向和相同的幅度下诱发了相对较深的尾巴。据我所知，这是第一项表明农药可以诱导脊椎动物形态变化的研究。...总的来说，这些发现表明，世界上使用最广泛的除草剂对非目标物种的影响可能比以前考虑的要深得多。
Rick A. Relyea.New effects of Roundup on amphibians: Predators reduce herbicide mortality; herbicides induce antipredator morphology.Ecological Applications, March 2012; 22 (2): 634 http://www.esajournals.org/doi/abs/10.1890/11-0189.1
3-8 《环境毒理学与药理学》2016年9月发表美国Sacred心脏大学生物学系Nicole M Royet al.《草甘膦可诱发Danio rerio（斑马鱼）的心血管毒性》【证据10】
鉴于草甘膦的广泛使用和接触，需要研究发育毒性。在这里，我们利用斑马鱼脊椎动物模型系统来研究草甘膦对心脏发育的早期影响。
从胚芽开始用50μg/ ml草甘膦浸泡胚胎的处理会导致心房和心室的结构异常、不规则心循环、部位倒置以及通过实时成像和免疫组织化学确定的48h心跳减少。使用fli-1转基因胚胎确定了体内血管也受到影响。为了确定受精后48h的效应是否是由于心肌前体的早期改变引起的，我们还研究了用Mef2抗体和通过mef2ca原位杂交进行的心肌细胞发育，并在早期心脏构图阶段发现了Mef2 / mef2ca染色模式的改变。
我们得出的结论是，草甘膦对斑马鱼的心脏具有发育毒性。
Nicole M Royet al., Glyphosate induces cardiovascular toxicity in Danio rerio,
Environ Toxicol Pharmacol. 2016 Sep;46:292-300
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27525560/
3-9 《应用毒理学杂志》2019年9月发表Stellenbosch大学植物与动物学系O. Oluwaseun Babalolaet al.《使用青蛙胚胎致畸试验-非洲爪蟾对三种草甘膦制剂的死亡率、致畸性和生长抑制》【证据11】
使用96小时青蛙胚胎致畸试验-非洲爪蟾方案，评估了三种基于草甘膦的制剂的胚胎毒性和致畸性。
非洲爪蟾的胚胎分别以0.3-1.3、130-280和320-560 mg酸当量（a.e。）/ L的浓度暴露于草甘膦除草剂农达（Roundup），Kilo Max和Enviro草甘膦。
结果显示，草甘膦除草剂农达的96小时LC50为1.05 mg a.e / L，比其他配方更具毒性。相比之下，Kilo Max和Enviro草甘膦分别为207 mg a.e./L和466 mg a.e./L。
观察到与草甘膦除草剂农达制剂接触相关的特征性畸形包括不适当的肠卷曲（图2G）、水肿（严重的全身性，腹部和心脏；图2D-2F）、起泡以及头部（在EC50浓度附近时出现椭圆形和异常头状）。一些畸形同时发生在单个生物体中。按照以下顺序记录了暴露于草甘膦除草剂农达制剂的各种畸形类别发生率：肠道异常（42.5％）；全身水肿（22.6％）；起泡（22.2） ％），腹部水肿（5.4％），心脏水肿（3.6％），头部（2.3％）和眼睛（1.4％）。
O. Oluwaseun Babalolaet al., Mortality, teratogenicity and growth inhibition
of three glyphosate formulations using Frog Embryo Teratogenesis Assay‐Xenopus,
J of Applied Toxicology, Sep 2019; 39(9) pp1257-1266
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jat.3811
4、丹麦养猪场饲料草甘膦残留与新生猪仔畸形密切相关：“脊柱和颅骨变形、头和腿部萎缩中的颅骨孔”、“带睾丸的雌性小猪”、“前肠和后肠未连接”、“颅骨、脊柱和腿畸形”。
4-1 《环境与分析毒理学杂志》2014年5月发表莱比锡大学兽医学院细菌学和真菌学研究所、丹麦Hvidsten养猪场、埃及萨达特市大学兽医学院禽和兔疾病系Monika Krüger et al.《畸形仔猪中草甘膦的检测》【证据12】
去年春天，由于新生仔猪畸形比例很高，丹麦的一位养猪场主将38只出生时活体但畸形的一日大仔猪带到的我们的实验室。有关报道提出了有关此事件可能原因的假设。注意到如果母猪在怀孕的前40天饲料中含有0.87-1.13 ppm的草甘膦（N-膦酰基甲基甘氨酸），畸形率就会增加到每出生260只仔猪就有一只畸形。如果母猪饲料中的草甘膦含量减少到为0.25 ppm，则每出生1432头只仔猪就有一只畸形。这些仔猪表现出不同的异常，例如耳部萎缩、脊柱和颅骨变形、头和腿部萎缩中的颅骨孔。在一只小猪中，一只眼睛没有发育，只有一只大眼睛。 还出现了不带象鼻舌的小猪和带睾丸的雌性小猪。 一只畸形的仔猪显示腹部肿胀，前肠和后肠未连接。
使用ELISA（酶联免疫吸附剂测定）检测了畸形安乐死的一天大的丹麦仔猪（N = 38）在不同器官和组织（如肺、肝、肾、脑、肠壁和心脏）中的草甘膦残留物。所有器官或组织中都检测到浓度不同的草甘膦。最高浓度出现在肺（范围0.4-80 µg / ml）和心脏（范围0.15-80 µg / ml）中。在肌肉中检测到最低浓度（4.4-6.4 µg / g）。
Monika Krügeret al., Detection of Glyphosate in Malformed Piglets.
J of Env & Analytical Toxicology. 2014, 4:5
4-2 丹麦Aarhus大学动物科学系丹麦食物与农业中心（DCA）2014年2月发表《关于“给牲畜饲喂抗草甘膦转基因大豆产品”的备忘录》【证据13】
丹麦食物与农业中心（DCA）受委托编写备忘录，以使丹麦食品、农业和渔业部能够评估对转基因作物（包括草甘膦处理过的作物）的潜在不利影响进行进一步测试或研究的需求。除其他外，这一要求来自公众对此问题的辩论以及实践中的一些观察结果。
丹麦兽医和食品管理局特别要求该备忘录包括：
1、关于转基因饲料与非转基因饲料的家畜生长和健康的已发表研究的摘要，包括这样的研究是否包括有关作物喷洒农药或饲料中农药残留的信息。
2、关于转基因饲料作物与非转基因饲料作物或饲料中农药残留的已发表研究的摘要。
3、评估是否需要使用转基因饲料进行饲养实验。与非转基因饲料相比，主要是豆粕，如果有必要，如何进行。
4、评估探索转基因饲料（主要是豆粕）是否与相应的非转基因饲料相比在农药残留或其他可能影响动物健康的含量或质量参数方面有所不同的评估。
5、丹麦农民的观察意见分析（附录1）。
根据此要求，DCA审查了这些领域的文献，以确定对动物健康的潜在风险。
结论
根据所审查的材料，DCA估计触发因素是草甘膦而不是转基因作物本身，并且已经建立了两个假设，这些假设需要实验证据被拒绝或接受：
A、草甘膦会影响动物肠道中的微生物种群（微生物群），对动物生产和健康产生次生影响
B、草甘膦会影响动物的矿物质状况，对动物的生产和健康产生次生影响
这些假设基于草甘膦的已知作用，即对细菌（在牲畜的肠道中数量很多）的作用和对矿物质（包括牲畜中必需的微量矿物质）的螯合作用。该假设得到有关农场动物的最新文献的支持，即，实验室研究中，草甘膦对致病原菌的抑制作用小于非致病原菌，而且在血液中微量矿物质含量低的丹麦奶牛的尿液中发现草甘膦。
基于多年来全球范围内草甘膦的使用不断增加，基于转基因大豆中草甘膦的含量，基于丹麦奶牛尿液中草甘膦的发现以及基于草甘膦对致病原性和非致病原性细菌的不同抑制作用，估计有必要检验两个陈述的假设。同样，有必要核实进口用于动物饲料的转基因大豆产品中有多少草甘膦。
研究应包括有关细菌菌株的体外实验室实验和对动物的体内实验。必须仔细设计最佳和详细的协议，但可能包括已知草甘膦浓度的豆粕和谷物。
丹麦兽医和食品管理局的以下声明支持了该备忘录的委托：“经过彻底的风险评估，欧盟已经批准了许多转基因植物用于食品和饲料用途，可以用于以与非转基因植物产品相似的方式。来自转基因植物的产品主要以蛋白质来源的形式存在，例如来自耐除草剂的大豆的豆粕，被广泛用于饲养猪，牛和家禽等农场动物。在这一领域的公开辩论中，通常会讨论这种产品是否比传统的非转基因作物的同类产品更不适合用作动物饲料，一些丹麦农民观察到从转基因大豆粉转为非转基因大豆粉后，动物生产有所改善。”
“有推测称，草甘膦除草剂农达中活性成分或载体残留物可能对动物产生潜在的不利影响，尤其是针对草甘膦除草剂农达具有抗性作物。需要一项备忘录，以评估该地区的现有知识，以便为丹麦粮食、农业和渔业部评估该地区进一步测试或研究的需要提供坚实的基础。”
丹麦兽医和食品管理局要求在备忘录中包括以下项目：
1、关于转基因饲料与非转基因饲料的家畜生长和健康的已发表研究的摘要，包括这些研究是否包括有关喷洒作物或饲料中农药残留的信息。
2、关于转基因饲料作物与非转基因饲料作物或饲料中农药残留的已发表研究的摘要。
3、评估是否需要使用转基因动物进行豆粕为主与非转基因饲料相比的饲养实验，以及，如必要的话，这样的试验应如何做。
4、评估是否有必要探索可能影响动物健康的转基因饲料（主要是豆粕）与相应的非转基因饲料是否与相应的非转基因饲料不同，包括农药残留或其他物质的含量或质量参数。
5、丹麦农民的观察意见分析（附录1）。
引言
与牲畜饲料最相关的转基因植物
在转基因植物中，耐除草剂的转基因植物是最普遍的，而在这些草甘膦耐受性的转基因植物中是最常见的。草甘膦是草甘膦除草剂农达（Roundup）和类似产品中的活性成分。还可以对植物进行基因改造以提高其抗虫性和其他性状或性状的组合。来自孟山都的耐草甘膦转基因植物被称为“抗农达”（Roundup Ready）。 耐草甘膦的大豆是最普遍的转基因作物。...
草甘膦功能– EPSPS酶
草甘膦通过沿着所谓的莽草酸酯途径与酶（5-烯醇丙酮酸shi酸酯-3-磷酸合酶，EPSPS）结合而起作用，该酶参与植物中芳香族氨基酸（苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸）的形成（Funke et al., 2006）。草甘膦的结合会阻断酶，抑制芳香族氨基酸的形成，植物因缺乏这些氨基酸而死亡。
草甘膦影响的生物
不仅在植物中，而且在许多微生物（真菌和细菌）和寄生虫中，都发现了莽草酸酯途径-进而是EPSPS酶。2003年，孟山都公司申请了将草甘膦用作抗寄生虫药的专利（例如，针对疟疾寄生虫）。该专利特别指出细菌和其他微生物对草甘膦敏感（https://www.google.com/patents/US7771736）。因此，已经很长一段时间以来就知道草甘膦会影响微生物，这意味着例如动物和人的肠道中的细菌会受到通过饮食进入系统的草甘膦的影响。尽管如此，草甘膦的风险评估中并未包括草甘膦对农场养殖动物和人类肠道中微生物的影响。
草甘膦敏感性的例外
EPSPS酶对草甘膦的敏感性存在例外。在许多生物中，有一些酶的变体未被草甘膦完全抑制，因此芳香族氨基酸的形成没有被完全阻断。诸如沙门氏菌和大肠杆菌等潜在致病细菌是可能带有不太敏感的EPSPS变体的某些微生物（参见专利EP 2327785 A2，https://www.google.com/patents/EP2327785A2?cl=zh_CN）。
耐草甘膦转基因植物的创建
耐草甘膦的转基因植物的生产正是利用了草甘膦功能的这种例外。农杆菌属细菌菌株CP4含有编码该酶变体的基因，其中草甘膦的结合不阻断该酶的功能。将该基因插入植物可产生耐草甘膦的转基因植物。因此，在用草甘膦喷洒后，这些转基因植物不会因缺少这些氨基酸而死亡。
动物和人类对EPSPS酶和草甘膦的接触
动物和人类不携带EPSPS酶，因此必须从饮食中获取这些必需氨基酸。但是，缺少EPSPS酶并不意味着草甘膦不能通过EPSPS酶途径影响人类和动物，因为动物和人类以多种方式受到肠道细菌的影响，而肠道细菌又可能是受到饮食中草甘膦的影响（Samsel＆Seneff 2013）。
动物和人类对EPSPS酶和草甘膦的接触
动物和人类不携带EPSPS酶，因此必须从饮食中获取这些必需氨基酸。 但是，缺少EPSPS酶并不意味着草甘膦不能通过EPSPS酶途径影响人类和动物，因为动物和人类以多种方式受到肠道细菌的影响，而肠道细菌可能以多种方式受到饮食中草甘膦的影响（Samsel＆Seneff 2013）。
草甘膦与金属的结合
草甘膦具有螯合性质，这意味着它与金属结合。草甘膦不仅与单一金属结合，而且与多种金属结合。 这些金属中的几种（例如锰和锌）是牲畜和其他动物中酶活性所必需的辅助因子。
另一个例子是金属钴，它在动物体内对于维生素B12的生产至关重要。与草甘膦结合的金属变得不活泼，因此无法发挥作用，无法在这些生物系统中用作构建基块。
农场养殖动物和人类的失活既可能发生在肠道的吸收前，有降低矿物质吸收的相关风险，也发生了吸收后草甘膦可以结合血液和组织中矿物质的吸收后风险。如果某些必需的矿物质被草甘膦束缚，则存在牲畜可能发生缺乏某些矿物质的风险，例如缺乏锌。对于处于特别敏感阶段（断奶、怀孕初期、出生等）的动物来说，这可能是一个特殊的问题，在这些阶段中某些矿物质对于某些重要的身体机能至关重要。
公开发表的文献中没有关于家畜中是否存在草甘膦的数量会影响矿物质有效性的数据。但是，必须注意，血液和组织中草甘膦的浓度尤为重要，因为在那儿需要矿物质来形成酶等。血浆和组织中游离金属离子的含量即使少量降低也可能很关键。例如，少量的锌缺乏会导致动物的先天缺陷和死亡，也可能引发腹泻。草甘膦的风险评估中未包括对通过牲畜饲料中残留含量吸收的草甘膦矿物质状况的潜在影响。
草甘膦的一般特性和对动物的次生效应的结论
高等动物没有EPSPS酶，因此不受EPSPS酶抑制作用的直接影响。但是，草甘膦通过影响肠道菌群，包括影响不同细菌种群之间的平衡（也包括让不同程度上利用EPSPS酶对草甘膦不敏感的变体的致病菌通过），而影响高等动物。
草甘膦与金属结合的能力可能会导致重要生物途径中的矿物质短缺。
草甘膦的风险评估
如前所述，过去对草甘膦进行的风险评估没有包括对牲畜肠道中微生物或其矿物质状态的影响。我们的评估是，当前草甘膦风险评估中包括的一般代谢和喂养实验不会揭示饲料中草甘膦残留物的特定作用，也不会揭示家畜肠道中的微生物对动物体内循环矿物质结合的影响，也不会揭示对健康产生任何次生影响。
该意见基于以下事实：评估中未包括针对牲畜矿物质状况和肠道微生物种群的特定参数，并且所用动物对这些参数的影响不够敏感。至关重要的是，所使用的测试动物必须处于相关的生理和生产阶段，并对被测物敏感-在这方面，对矿物质状态和肠道微生物群的影响敏感。例如，对于猪肠道微生物群来说，敏感的生理阶段可能是在断奶后从牛奶向固体饲料过渡的过程中，对于奶牛来说，在产犊后牛奶产量如此之高以至于营养不仅来自于肠道饮食也来自她的身体储备。关于矿物质状态的敏感生理阶段可能是，例如，怀孕初期，胎儿和断奶后广泛的细胞分裂和细胞分化。农场养殖动物经历了这样的敏感时期，但风险评估未解决这些条件。...
转基因农产品的随机测试
在欧盟，对草甘膦规定的最大残留量为每公斤大豆/豆粕20毫克；为了进行比较，大麦和燕麦的最大残留量也是每公斤20毫克，而小麦则为每公斤10毫克。...
用转基因饲料和非转基因饲料喂养的动物的实验文献中通常没有关于农作物喷洒或农药残留的信息。...
尚无耐草甘膦转基因作物中草甘膦除草剂农达水平的记录，但估计阿根廷每公顷大豆的生产量为8升（DanWatch, 2011）。...
喷洒作物的动物饲料中可能会残留农药，包括草甘膦。转基因饲料与非转基因饲料作物和动物饲料中的草甘膦残留数据很少，以转基因饲料为牲畜的实验中发表的结果中通常不包括有关草甘膦残留方面的信息。....
关于抗除草剂转基因植物的饲料中农药残留的可用信息很少。迫切需要提供此信息，尤其是耐草甘膦转基因大豆的广泛使用所引起的饲料中的草甘膦信息，并且需要有关收获前喷雾的谷物中草甘膦残留物的更多信息。...
草甘膦处理过的作物在何种程度上具有较低的矿物质含量并因此导致牲畜的矿物质供应下降尚不确定。
... 考虑到矿物质对于牲畜重要功能的重要性，有必要掌握有关草甘膦喷洒的作物中微量矿物质（如锰，钴和锌）含量的知识。...
附录A：... 农民2：养猪者
养猪生产者的观察，记录和分析均来自喂养常规母猪群的原料，约450只猪在2011年4月更换为不含GMO的大豆-但后来为断奶的猪准备了更多的库存。农夫阅读了有关该主题的专业文献，关于青蛙和鸡胎儿的伤害的文章（见下文）说服了他认为草甘膦引起了他在新生猪中观察到的畸形。...
新生猪出现许多畸形
- 畸形率：草甘膦的饲料含量高于1 mg / kg时，其含量是0.12 mg / kg时的两倍（Thomas Bøhn进行的统计分析）
在畸形猪的许多组织中（包括其他组织）测量到草甘膦（ng / g）：肺，肝，肾，心脏等。...
关于生殖状态的观察，即流产、畸形和每窝产仔数表明，前面解释的矿物质结合可能与饲料中草甘膦的浓度有关。...
Martin Tang Sørensenet al., Memorandum on "The feeding of genetically modified glyphosate resistant soyproducts to livestock", Danish Centre for Food and Agriculture(DCA), Dept of Animal Science, Aarhus University, Denmark, 4 February 2014
4-3 丹麦养猪场主Borup Pedersen2017年4月向海牙起诉孟山都草甘膦除草剂特别法庭提交的证词《猪场研究--显示与转基因大豆与草甘膦除草剂关联的健康问题、畸形、流产与不育问题》【证据14】
2011年，我开始怀疑猪饲料中的转基因大豆是造成我的猪群一系列健康问题的原因。我注意到每批转基因大豆造成猪群中不同的健康问题，特别是拉稀与母猪繁殖猪仔的能力。开始读了将转基因大豆与不育、畸形、弱劣后代与内部器官损伤关联的一些科学论文后，我对转基因大豆更加担忧。所以我开始想转基因大豆也是造成我在猪群中见到的健康问题的根源。
我的第一项措施当然就是是将猪饲料中添加的转基因大豆变换为非转基因大豆（即天然大豆），结果见到显著的差异。猪群中的拉稀问题消失了，猪群用药量下降为喂养转基因大豆成分饲料时用药量的三分之一。同时，母猪群的其他疾病问题，如母猪胃溃疡和胀肚，也消失了。喂养转进因大豆成分饲料时，这些疾病成为母猪死亡的主要病因。...
变换为非转基因大豆成分饲料后，母猪更加平静，生产更多猪奶。...我们注意到，喂养转基因大豆成分饲料时生育一窝猪只能有10只至11只猪仔的老母猪，变换为非转基因大豆成分饲料后，这些老母猪突然生育哺乳一窝猪达到14只。...养猪场的效率与经济效益得到改善。
2011年的研究表明草甘膦残留造成我在猪群中见到的相同类型畸形，我原先预计变换为非转基因大豆成分饲料后畸形猪仔问题也应当消失，但并非如此，猪群中继续出生畸形猪仔。
我们开始检测饲料中草甘膦残留水平、并且记录、拍照、拍摄视频、冷冻出生的畸形猪仔。两年期间总共生产了32,000只猪后，我们可以结论：饲料中草甘膦残留水平最低0.1克/吨（=0.1ppm）到0.2ppm -- 1.1ppm 与2.2ppm与养猪场同期出生的颅骨、脊柱和腿畸形三类畸形猪仔比例1/1871 -- 1/1195 -- 1/529 -- 1/246成线性对应关系。【请参看证据11】
了解了每天饲料中草甘膦残留的水平，我在养猪场计算机上分析了有关的数据，得以回顾给定期间的自然流产，令人恐惧发现猪饲料中草甘膦残留水平从0.2ppm到1.1ppm与2.2ppm综合在一起，我看到自然流产率增加了500%！
我也采集了当地奶牛场牛奶。这个奶牛场的农民患了癌症，希望了解自己奶牛场牛奶草甘膦残留水平。令人痛心的时，奶牛场农民49岁已经去世。他的癌症始于肾，农田与我们养猪场邻居的另外两位农民因前列腺癌也已经去世。
总结我的发现，毫无疑问，对农作物喷洒草甘膦除草剂是造成养猪场猪生育问题、自然流产与畸形猪仔的直接原因 ...农民的职责是向人民提供健康的、富营养的与足够的食物。转基因或者草甘膦不提供任何这些！
Borup Pedersen, A farm study - showing Health issues, Deformities, Abortions and Fertility problems in pigs linked to GM soya and Roundup- Testimony presented to the Special Court
for Prosecuting Monsanto's Glyphosate Herbicide, Hague, April 2017
http://www.monsanto-tribunal.org/upload/asset_cache/223719479.pdf
5、美国、阿根廷、巴拉圭学者流行病学调查确认高浓度草甘膦环境暴露与先天性畸形异常发生率剧增相关：“神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂”、“母亲直接或间接接触农药的儿童中约有40％出生时患有某种畸形”、“1991年先天性先天缺陷发生率为16.2%， 2003年达到37.1％”、“生殖器异常，四个肢体异常，肾脏和泌尿系统异常，消化系统异常，心脏疾病和胆道闭锁、唇裂和甲状腺舌囊肿”、“心脏房间隔缺损（ASD），动脉导管未闭（PDA），发育不良左心综合征（HLHS），气管食道瘘管（TEF），肥厚性幽门狭窄（HPS），先天性巨结肠症，尿道下裂，上肢和下肢缺陷以及胸膜闭锁”。
5-1《环境健康观点》2002年6月发表美国明尼苏达大学环境医学与病理学实验室Vincent F Garryet al.《美国明尼苏达州红河谷地区农药施用者的出生缺陷、受孕季节和性别》【证据15】
我们先前证明，在美国明尼苏达州红河谷（RRV）居民的孩子中，出生缺陷的频率在1989-1991年期间显着高于该州的其他主要农业地区，其中男性农药施用者的孩子风险最高。1997年至1998年对695个家庭和1,532个孩子进行的目前这个较小型横断面研究对由父母报告的出生缺陷确定的农场家庭生殖健康结局进行了更详细的检查。
在本研究中，在出生的第一年，出生缺陷率是每1000名31.3例出生，其中83％报告的出生缺陷由医学记录证实。后来，在出生后的头3年内将那些被确认患有出生或发育障碍的儿童包括在内，导致出生缺陷率为每千人47.0名儿童（来自1,532例活产的72名儿童）。春季受孕比其他任何季节受孕出生的儿童有显着更高先天缺陷率（7.6 vs. 3.7％）。十二个家庭有一个以上有先天缺陷的孩子（n = 28个孩子）。来自重复性先天缺陷家庭的儿童中有42％为春季受孕的孩子，这一比例大大高于其他任何季节。
使用除草剂草甘膦在神经行为类别上的OR为3.6（CI，1.3-9.6）。最后，这些研究指出：（a）在春季使用除草剂可能是观察到的先天缺陷的一个因素，（b）杀真菌剂可能是确定明尼苏达州红河谷（RRV）家庭子女性别的重要因素。因此，两类显著不同的农药似乎对不同的生殖结果有不利影响。需要基于生物学的验证性研究。...
在不利的出生和发育影响组中，父母使用磷酸正氨基除草剂（草甘膦，Roundup）的比例非常高。有父母报告的ADD / ADHD（注意力缺陷综合症/注意力缺陷多动症）的儿童中有43％（14个中的6个）使用了膦酰氨基除草剂（OR = 3.6；CI为1.35-9.65）。与主要器官和/或功能系统相比，没有其他常用的杀虫剂与特定的不良出生缺陷或发育影响有独特的关联。与除草剂的使用相比，在农用农药的4-6个月内使用不同种类的农药，而没有其他种类的农药（除草剂的使用期为4月15日至7月1日）表明，所用农药之间的相互作用可能是观察到出生缺陷的一个因素（表6）。
关于除草剂草甘膦，我们目前的研究表明，ADD / ADHD（注意力缺陷综合症/注意力缺陷多动症）与该除草剂的使用之间存在暂时的联系。...最后，在按类别分类的14种农药中（表5），只有膦和草甘膦显示出与非常高的不良出生和神经发育作用显着相关。...
Vincent F Garryet al., Birth defects, season of conception, and sex of children born to pesticide applicators living in the Red River Valley of Minnesota, USA.
Env. Health Perspectives. 1 June 2002;
https://ehp.niehs.nih.gov/doi/10.1289/ehp.02110s3441
5-2 《流行病学》2004年4月发表美国加州大学洛杉矶分校Rull, Rudolph P.《神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用》【证据16】
我们评估了1987年至1991年在加利福尼亚州出生的两个出生队列中确定的59种农业农药对母亲的环境暴露对神经管缺陷（NTD）的影响。
评估了受孕月附近发生的农药施用距离1,000米以内的母亲居住区 ...。
此外，我们估计了两种主要的神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂的单独暴露效果，并针对这些结果采用了多级分层模型。与传统的逻辑模型相比，基于层次模型的效果估计的精度大大提高，因为效果估计已缩小为子组的平均值。
单个农药的暴露率很低...，因此限制了我们检测特定农药影响的能力。对于神经管缺陷（NTD），我们观察到 ... 草甘膦（OR：1.50; 95％CI：1.00，2.40）（表2）。在多层次模型中检查NTD亚型，我们观察到以下有机磷化合物的关联：...草甘膦与无脑症（OR：1.55; 95％CI：0.85，2.85）。
Rull, Rudolph P.et al., Neural tube defects and maternal residential proximity to agricultural pesticide applications. Epidemiology. July 2004; 15(4)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16495467/
5-3《儿科学》2007年2月发表巴拉圭国立Asunción大学（UNA）医学系母婴中心小儿科、巴拉圭Encarnación地区医院Benítez-Leite Set al.《先天性畸形与有毒农药相关》【证据17】
目的：研究在巴拉圭Itapua省Encarnacion地区医院出生的新生儿接触农药与先天性畸形之间的关系。
材料和方法：2006年3月至2007年2月进行了一项前瞻性病例对照研究。病例包括所有先天性畸形的新生儿，所有对照都是在此后立即出生的同性健康儿童。医院外的分娩没有计算在内。，“接触”被认为是其他已知的先天性缺陷风险因素除外的与农用化学品的任何接触。
结果：共分析52例和87例对照。每个月的平均出生数为216。与危险因素显着相关的因素是：居住在经过处理的田地附近（OR 2.46，CI 95％1.09-5.57，p <0.02），居住位置小于1公里（OR 2.66，CI 95） ％； 1.19-5.97，p <0.008），在家中储存农药（OR 15.35，CI 95％，1.96-701.63），p <0.03），直接或意外接触农药（OR 3.19，CI 95％，0.97） -11.4，p <0.04），以及畸形家族史（OR 6.81，CI 5％，1.94-30.56，p <0.001）。其他已知的畸形危险因素没有显示统计学意义。
结论：结果表明接触农药与先天性畸形之间存在关联。
Benítez-Leite Set al., Congenital Malformations Associated with Toxic Agricultural Chemicals. Pediatr. (Asunción), Feb 2007; 34(2)
http://scielo.iics.una.py/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1683-98032007000200002&lng=en&nrm=iso
5-4 《拉丁美洲生物多样性》2009年6月报道《巴拉圭：放宽法律有利于大豆》【证据18】
“巴拉圭每年使用的农药超过2400万升，继续造成儿童死亡、新生儿畸形和环境恶化。尽管如此，巴拉圭国会议员于（2009年）5月22日批准了一项法律，允许使用对人类健康有剧毒的化学物质。“
卢戈总统申明他愿意在法律法规范围内与农业企业家对话，但警告说，他将执行有关在农业机械化生产中负责任使用农药的立法。 总统在为他的法令辩护时说：“该法令起源于卫生部和环境部（SEAM），除了遵守法律外，别无他法，并防止因滥用草甘膦或农达除草剂而造成的任何污染。
大豆种植扩大
... 企业家农业的扩张导致大豆单一栽培在1999年至2004年间增加到将近100万公顷，在2007/2008年农业期间达到280万公顷，占该国总面积的5％以上。东部地区的八个部门占农业面积的61％。巴拉圭是南美大豆种植农业面积主要国家，是世界第四大油籽出口国和第六大生产国。
... 巴拉圭实际上受到了大豆的入侵，其社会和健康后果是空前的。帕劳说：“从空中喷洒除草剂正在使大豆田周围的社区中毒，迫使农民离开他们的土地，然后由农业企业家以荒谬的价格将其购买。”
生命威胁
Itapúa，AltoParaná，Canindeyú和Caaguazú等高产转基因大豆的部门受到农药污染导致的畸形和死亡病例的影响最大。
巴拉圭儿科协会于2006年3月至2007年2月在Itapúa部门进行的一项研究表明，母亲直接或间接接触农药的儿童中约有40％出生时患有某种畸形。研究警告说，如果孕妇居住在大豆作物的一公里范围内，则患有先天性畸形的孩子出生的风险会增加一倍。
Paraguay: permisiva ley a favor de sojeros, Biodiversidad en America Latina. 24 junio 2009
巴拉圭：放宽法律有利于大豆，拉丁美洲生物多样性，2009年6月24日
http://www.biodiversidadla.org/content/view/full/50128
5-5 阿根廷国立 Cordoba大学医学系2010年8月发布《全国农作物喷洒城镇医师第一次会议报告》【证据19】
这些地区的医生强调，他们在相同的人群中服务的时间通常已经超过25年，但是近年来发现的情况却很不寻常，并且与系统性喷洒农药紧密相关。
... 该会议委员会成员，Chaco省卫生部国家代表安娜·利亚·奥塔尼奥（Ana Lía Otaño）博士介绍了第一份报告的结果，强调了省一级新生儿每万名活体新生儿出生缺陷的发生率显著在增加：“1997年：19.1；2001年：28.1；2008年：85.3（畸形数/每万名活体新生儿）”。
Otaño博士提供的Chaco省儿童癌症数据，记录了其他医生在他们自己的观察中发现的结果-发病率相对于既往水平显着增加，如表2所示：“1985年：10.5；1991年：8.03；11.3；2007年：15.7（例/10万儿童）”。
《拉丁美洲先天性出生缺陷记录》（ECLAM，拉丁美洲犯罪登记中心）报告说，Misiones省有神经管缺陷的活产率为0.1/1000。但是该省Posadas医院儿童外科医生Demaio博士在他的医院记录的发生率为7.2/1000（是0.1的70倍），并且每年都在增加。他的团队对这些家庭的起源进行了地理定位，发现其赤字严重且无效，所有家庭都来自熏蒸程度很高的地区。 在Misiones患儿童癌症的情况中也观察到类似情况。...
Demaio博士强调，农用化学品对人体健康完整性造成的损害尚未确认到其实际大小；关于先天性先天缺陷，他认为我们不知道流产数量的确切范围。
Cordoba大学妇科医院妇产科和新生儿科大学医院遗传学家Gladys Trombotto教授介绍了她在该i妇科医院进行的超过111,000例活产流行病学研究结果：
从1971年到2003年，患有严重先天性先天缺陷的婴儿的比率增加了2到3倍。1991年的第一份报告5指出，每个活产儿的主要先天性先天缺陷（MCM）的发生率为16.2%， 该比率在2003年达到37.1％。
...每年每公顷同一块土地上反复喷洒的草甘膦的数量都在增加。这可能是因为杂草已变得具有抗性。从1996年开始，每公顷的喷洒量不足2升，而今天某些地区每公顷喷洒10升，而在其他地区则每公顷喷洒近20升。
... 直接喷洒在1200万阿根廷人居住的地区。这意味着在房屋、学校、公园、水源、运动场和工作区域中喷洒了足足三亿公升农药。换句话说，喷洒到他们的生活上。这些人口受到在农作物喷洒的小镇工作的医生的治疗，在这些地区，我们注意到癌症、先天缺陷和生殖疾病增加令人震惊，再也无法掩盖。
Vazques MA, Nota C. Report from the First National Meeting of Physicians inthe crop-sprayed towns, Faculty of Medical Sciences, National University ofCordoba, August 27–8, 2010
5-6 《环境保护杂志》2018年3月发布阿根廷国立Cordoba大学医学院儿科诊所、病毒学研究所流行病学委员会、阿根廷国立La Plata大学精确科学学院环境研究中心Medardo Avila-Vazquez et al.《草甘膦的环境暴露和阿根廷农业人口的生殖健康影响》【证据20】
近年来，地方政府当局以及当地居民和医生对当地自然流产，先天性异常和癌症的数量明显增加有所担心，因此要求国立 Cordoba 大学医学部评估健康状况（UNC）。
在土壤和谷物粉尘中检测到草甘膦，发现农村土壤中的草甘膦浓度甚至高于农业地区。该地区每年使用650吨草甘膦，并对城镇内部悬浮的土壤和尘土进行了污染，从而造成了每人每年79公斤草甘膦的环境暴露负担。我们找不到其他相关的污染源。
开始，整个城镇的外围都没有林业，取而代之的是大豆和玉米。 这些农作物经常通过地面设备和对农作物飞机喷洒进行农药处理。
当地的农艺师和农用化学施药者报告说，在Monte Maíz镇周围，转基因大豆和玉米作物每年每公顷使用10公斤草甘膦。该地区每年有650吨草甘膦雾化喷洒，对草甘膦造成的环境暴露总负担为每人每年79公斤，这因农业或非农业活动以及草甘膦的空间分布而异。该地区每年总共使用975吨所有种类的农药。
最近5年中，在981名接受调查的育龄妇女中发生了98例自然流产； 其中62例仅发生1次事件；15例发生2例，其中2例发生3例流产；意外流产率为每100个育龄妇女10％。接受调查的981名妇女中发生过自然流产者为79名妇女（占8％）。
在过去的10年中，研究的人口中共有853例出生，有25名儿童出现了先天性严重异常并在进行该项研究时还存活（四个神经系统异常，五个生殖器异常，四个肢体异常，三个肾脏和泌尿系统异常，两个消化系统异常，4例心脏疾病和1例胆道闭锁、唇裂和甲状腺舌囊肿）。总患病率为3％（表3），但是不包括在此期间死亡的畸形儿童。如果包括死者在内（按十12例计算），先天异常的发生率将达到4.3％...。
Monte Maíz五年内的自然流产率（10％）比国家卫生部2005年进行的国家分析报告的自然流产率（每年0.6％）高出三倍[15]，也高于由我们的团队在Cordoba附近进行的一项社会健康调查（2016年），该地区在5年中自然流产的发生率为3.7％[16]。
这种增加的患病率与Aiassa等人的发现一致。他们在距离蒙特迈兹（Monte Maiz）180公里的Las Vertientes地区发现有166户家庭的Cordoba镇的自然流产率为19％[17]。另一项 “安大略省农场家庭健康研究”发现，在怀孕前容易接触草甘膦的农场家庭中，自然流产的比率为18.7％[18]。
我们的研究验证了阿根廷农业村庄中高浓度的草甘膦环境暴露与生殖疾病（自然流产和先天性异常）的发生率增加有关，但无法断言原因。为此目的，需要进行对为此设计的进一步研究。
Medardo Avila-Vazquezet al., Environmental Exposure to Glyphosate
and Reproductive Health Impacts in Agricultural Population of Argentina.
J of Environmental Protection. March 2018Vol.9 No.3
https://www.scirp.org/Journal/PaperInformation.aspx?PaperID=83267
5-7 《出生缺陷研究》2019年4月发表美国环境保护局国家环境评估中心、纽约州Icahn医学院儿科系环境医学与公共卫生系、妇幼保健系、儿科系等机构KM. Rappazzoet al.《2003-2005年北卡罗来纳州出生队列中特定农业农药有效成分和出生缺陷的孕妇居住暴露》【证据21】
出生缺陷占活产婴儿的3％（Mai et al., 2013），是婴儿死亡率的主要原因，并且在整个发育过程和生命过程中造成持续的健康问题（Decoufle, Boyle, Paulozzi, & Lary, 2001;Matthews & MacDorman, 2013）。... 怀孕前或怀孕期间的农药暴露是与出生缺陷有关的环境因素之一...
在此分析中，我们将对先前的工作进行扩展，以包括估计的北卡罗来纳州常用的特定农药活性成分的暴露量。通过结合居民对农作物的接近度和农药使用数据来估算这些活性成分的暴露量，并计算与已知出生缺陷的相关性。
在我们之前的分析中，有10种类型出生缺陷（共检查了42种类型）与总农药暴露呈正相关（Rappazzo et al., 2016）。 这些先天缺陷在这里用作结局种类：心脏房间隔缺损（ASD，继发性房间隔缺损，与卵圆形未闭孔分开），动脉导管未闭（PDA）（出生体重> 2500克），发育不良左心综合征（HLHS），气管食道瘘管（TEF），肥厚性幽门狭窄（HPS），先天性巨结肠症（Hirschsprung’s disease），尿道下裂，上肢和下肢缺陷以及胸膜闭锁。
结果：
表2a、与草甘膦暴露相关性最高的畸形类型：心脏房间隔缺损（ASD）、动脉导管未闭（PDA）、肥厚性幽门狭窄（HPS）、尿道下裂（Hypospadias）。
表2b、与草甘膦暴露相关性最高的畸形类型：发育不良左心综合征（HLHS）、气管食道瘘管（TEF）、鼻后孔闭锁（Choanal Atresia）、先天性巨结肠症（Hirschsprung’s disease）、上肢缺陷、下肢缺陷。
对于草甘膦，关于生殖健康结局的研究非常有限。在人类中，草甘膦与先天缺陷有着不同的联系，少数研究没有明确的关系（de Araujo, Delgado, & Paumgartten, 2016）。在斑马鱼中，草甘膦暴露导致心脏异常（Roy, Ochs, Zambrzycka, & Anderson, 2016），抑制碳酸酐酶活性并导致身体畸形（Sulukan et al., 2017）。
KM. Rappazzoet al., Maternal Residential Exposure to Specific Agricultural Pesticide Active Ingredients and Birth Defects in a 2003-2005 North Carolina Birth Cohort.
Birth Defects Res. 2019 Apr 1; 111(6): 312–323
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6445756/
6、法国暴露草甘膦除草剂造成一个家庭两个新生儿畸形病例：“一个是生长激素缺乏症、肛门无孔和信中房间隔缺损。另一个患尿道下裂、小阴茎、生长激素完全缺乏和肛门无孔”。
6-1 《职业环境医学》2010年5月发表法国Caen大学生物化学实验室、法国基因工程研究与独立信息委员会（CRIIGEN）R Mesnage,G-E Séraliniet al.《两例接触多种农药后出生缺陷重叠Stratton-Parker综合征》【证据22】
2009年1月，一对农业夫妇与我们联系，因为他们的三个孩子中有两个出生时患有先天性畸形。其中一个出生时患生长激素缺乏症、肛门无孔和信中房间隔缺损。另一个患尿道下裂、小阴茎、生长激素完全缺乏和肛门无孔。这些疾病很少在同一个人或家庭中一起遇到。但是，在某些情况下，它们已被归类为Stratton-Parker综合征下的其他症状，其病因尚不清楚。[12]
... 在我们的病例中，迄今为止尚无已知的家族先例或遗传起源，因此可以推测环境起源。尤其是在怀孕期间，这个家庭使用了许多农药。
父亲在没有保护的情况下每年喷洒了1.3吨以上的农药（包括300升草甘膦除草剂），...
Mesnage, G-E Séraliniet al., Two cases of birth defects overlapping Stratton-Parker syndrome after multiple pesticide exposure. Occup Environ Med. 2010 May;67(5):359.
https://oem.bmj.com/content/67/5/359
6-2 《环境保护杂志》2012年9月发表法国 Caen大学生物化学实验室、法国基因工程研究与独立信息委员会（CRIIGEN）、法国Limoges大学医院药理与毒理学科R Mesnage, G-E Séralini et al.《一个农民家庭中的草甘膦暴露》【证据23】
我们以前曾报道过一个农民家庭中的两例先天性缺陷，包括肛门穿孔、生长激素缺乏症、尿道下裂、心脏缺陷和微阴茎[1]。...
我们想知道是否可以检测到农民喷洒农药后是否能检测到他与他的家人暴露于农药的浸迹，以及如何与何时造成。
这位农民一家人居住在距离农田1.5公里的地方。农民用拖拉机喷洒机在3块农田上喷洒了55升不同浓度的草甘膦除草剂。此外，他还用手动喷雾器喷0.75升草甘膦除草剂。稀释制剂期间，他戴着口罩和手套，但是从拖拉机上喷洒时没有戴口罩和手套，而且，他还打开了拖拉机的窗户。手动喷洒时，他戴着手套，但没有戴口罩或防护服。处理农药4小时后，他回家与家人一起吃饭，仔细洗了手，换了衣服。但是，他没有洗澡。
从喷洒时直至两天后，很容易在父亲的尿液中检测到草甘膦（图1）。喷洒处理开始后7小时达到9.5 µg / L峰值，相当于操作结束后3小时。喷洒两天后，尿液中草甘膦发现稳定在2 µg / L。父亲的尿液中每24小时的草甘膦平均浓度在第0天，第1天和第2天分别为4.35、0.95和1.9 µg / L。这时在一个孩子尿液中也发现了2 µg / L的草甘膦。
母亲和两个孩子中未检测到草甘膦水平。
令人惊讶的是，即使他的三个孩子中的一个也生活与农田距离很远，孩子的尿液中仍存在可检测到的草甘膦。草甘膦的浓度为2 µg / L（ppb）。检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1和2 ppb。这可能是由于与父亲的长时间接触，例如皮肤接触。
对于农民及其家人暴露草甘膦的检测结果，表明整个家庭都取决于防护情况暴露于农药中[9,10]。这项工作中的草甘膦除草剂残留水平与农业暴露后的尿液浓度相对应，从几ppb到233 ppb（几何平均值2.3 ppb）[9]。
Robin Mesnage, Gilles-Eric Séralini et al., Glyphosate Exposure in a Farmer’s Family,
J Environmental Protection, Sep 2012; 3(9)
https://www.scirp.org/journal/PaperInformation.aspx?paperID=22645
7、2010年以来，美国华盛顿州Yakima县、Benton县与Franklin县新生儿无脑症发生率（超过美国其他地区4倍以上）与草甘膦密切相关：
7-1 《ABC新闻》2013年7月报道《华盛顿州卫生官员被高缺陷率困扰》【证据24】
华盛顿州卫生部周二发布的一份报告说，自2010年以来，邻近的Yakima县、Benton县与Franklin县异常多怀孕人数受到出生缺陷性无脑症的影响，导致新生儿的大脑严重发育不良。
在美国，每10,000例年出生的婴儿大约有一到两个无脑病例。然而，在三个人口总计约515,000的华盛顿县中，卫生部门发现，从2010年1月至2013年1月，报告的病例异常多，每10,000例分娩中大约有8例无脑。
无脑是一种先天缺陷，几乎总是致命的，胎儿的神经管无法正确闭合。结果，胎儿大脑的前部不发育，而大脑的另一部分则暴露于羊水，从而造成进一步的损害。发育缺陷的大多数胎儿死产。那些能够存活下来的人通常在出生后不久就死亡。
孕妇饮食中缺乏足够的B-维生素叶酸可能会导致无脑症。但是，地方疾病预防控制中心和州卫生部门的官员发现，孕妇因先天缺陷而受到影响的妇女和健康怀孕的妇女所服用的补充叶酸的量没有显着差异。
2013-07-17 Gilian Mohney, Washington State Health Officials
Stumped by High Rate of Birth Defects, ABC News, 17 July 2013
7-2 美国地质调查队（USGS）2016年12月发表《科学调查报告2007-5180：农药的发生和分布》【证据25】
在2000年的生长期，Yakima 河流域的农作物估计应用了146种有机农药[2]（表3）。
估算值基于国家农业统计局（NASS）的县级农业统计数据，并在与Kittitas，Yakima和Benton县的私人作物化学顾问和农业推广机构的访谈中进行了验证和纠正。关于通行权申请的数据是从州和地方交通运输部门以及灌溉区获得的。农药汇编的详细信息由Ebbert和Embrey（Ebbert and Embrey， 2002）提供。
在本研究中分析了146种施用农药中的75种（占51％），在这75种农药中，检出了47种（占63％）。只有草甘膦（Roundup®，Rodeo®）大量施用，但本研究未进行分析。
USGS, Pesticide Occurrence and Distribution, Scientific Investigations Report 2007–5180,
U.S. Geological Survey, 01 Dec, 2016
https://pubs.usgs.gov/sir/2007/5180/section3.html
7-3 《流行病学》2004年4月发表美国加州大学洛杉矶分校Rull, Rudolph P.《神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用》【证据26】
我们评估了1987年至1991年在加利福尼亚州出生的两个出生队列中确定的59种农业农药对母亲的环境暴露对神经管缺陷（NTD）的影响。
评估了受孕月附近发生的农药施用距离1,000米以内的母亲居住区 ...。
此外，我们估计了两种主要的神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂的单独暴露效果，并针对这些结果采用了多级分层模型。与传统的逻辑模型相比，基于层次模型的效果估计的精度大大提高，因为效果估计已缩小为子组的平均值。
单个农药的暴露率很低...，因此限制了我们检测特定农药影响的能力。对于神经管缺陷（NTD），我们观察到 ... 草甘膦（OR：1.50; 95％CI：1.00，2.40）（表2）。在多层次模型中检查NTD亚型，我们观察到以下有机磷化合物的关联：...草甘膦与无脑症（OR：1.55; 95％CI：0.85，2.85）。
Rull, Rudolph P.et al., Neural tube defects and maternal residential proximity to agricultural pesticide applications. Epidemiology. July 2004; 15(4)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16495467/
7-4 《神经学与神经生物学杂志》2017年7月发表麻省理工学院计算机科学与人工智能实验室、浸入式健康自然疗法独立学者Seneff S, Nigh GL《草甘膦和无脑症：千割之死》【证据27】
在2010年1月至2016年1月之间，在华盛顿州的Yakima县, Benton县与Franklin县确认有42例无脑婴儿。在这段时间内，这些县的无脑率明显高于美国总人口的无脑率。 2012年和2013年的发病率特别高。Yakima河是Yakima河谷的主要灌溉水源，流经无脑率异常高的所有三个县。从2009年开始，Benton县杂草委员会从能源部获得了一笔赠款，用于控制Yakima河流域的一种有害的入侵杂草，称为开花高峰[26]。人们担心这种杂草会阻碍娱乐活动，对灌溉系统和湿地产生负面影响，并改变水生食物网。
在接下来的四年中，用草甘膦除草剂反复处理了六英里的海岸线，由于被认为无毒，因此被认为是最佳选择。草甘膦还用于防治其他水杂草，例如紫色和魔杖珍珠菜和日本虎杖。在Yakima河谷，草甘膦的最高施用量是在2012年和2013年，即无脑畸形发生率高峰期。
草甘膦破坏神经发育与造成新生无脑畸形密切相关的证据
锌缺乏症：草甘膦螯合锌 ...
维生素B12：草甘膦可能通过酶促抑制和钴离子螯合而造成这种营养素的缺乏。...
叶酸：草甘膦对莽草酸酯途径的抑制作用将减少这些细菌对孕妇血清叶酸的贡献。...
维甲酸：草甘膦对肝脏中能降解RA的CYP酶的影响...增加了增强RA信号活性的伤害。 ...
蛋氨酸：草甘膦可抑制多种酶，这些酶参与大肠杆菌中无机硫酸盐同化成蛋氨酸。...
维生素D：草甘膦已显示出抑制肝脏CYP酶活性的作用通过削弱激活来诱导维生素D的缺乏。...
糖尿病，无脑症和草甘膦：过去的二十年期间，糖尿病发病率的上升与核心农作物使用草甘膦的上升之间存在非常密切的相关性。... 草甘膦引起II型糖尿病的机制。...
结论
有多种途径导致新生儿无脑症畸形，每一种途径都可能受到草甘膦的不利影响。草甘膦已知的金属螯合特性以及对肠道微生物的不利影响导致几种维生素、矿物质和氨基酸蛋氨酸的缺乏，所有这些都与无脑症有关。草甘膦会对丝氨酸蛋白酶产生不利影响，而丝氨酸蛋白酶对于发育至关重要。草甘膦已显示出诱导氧化应激，这导致金属蛋白酶螯合锌和随后的锌缺乏。农作物中草甘膦的使用与世界范围的糖尿病流行密切相关，而母体糖尿病是无脑的重要危险因素。草甘膦引起的多种激素和酶失调以及同型半胱氨酸代谢受损，导致与脑无脑有关的胎儿垂体和肾上腺病理。草甘膦对适当的LDL受体完整性和整体稳态的多重影响是另一个危险因素。尽管许多证据仍属偶然，但我们认为，此处提出的大量论据表明
迫切需要进一步的研究来确认或否认这些联系。
预防原则指出：“如果一项行动或政策有可能对公众或环境造成损害的可疑风险，在没有获得科学共识的情况下，则举证责任在认为无害采取行动一方”[217]。
基于草甘膦的除草剂（GBH）已在商业和居民区应用了近45年。 本文审查的证据提供了草甘膦可能通过这些途径损害胚胎和胎儿的发育的许多非常特殊的途径，从而显着增加导致无脑症风险，而关于草甘膦的流行病学和动物研究支持与大脑神经发育受损的联系。
尽管全球越来越多的政府监管机构对草甘膦除草剂的使用施加了限制，尽管安全问题日益严重，但美国和其他国家/地区但仍继续允许草甘膦除草剂的广泛使用，本文在这里仅审查了其中只有一小部分问题。
考虑到怀孕期间新生儿无脑症的严重性，我们强烈鼓励监管机构遵循“预防原则”暂停草甘膦除草剂的商业性和居民区使用，直到审查清楚最终证明草甘膦在本文中描述的导致无脑症的任何途径与其他令人信服的其他病理联系中均无联系不起作用为止。
Seneff S, Nigh GL, Glyphosate and Anencephaly: Death by A Thousand Cuts.
J Neurol Neurobiol,18 Jul 2017;3(2)
https://sciforschenonline.org/journals/neurology/JNNB-3-140.php
8、阿根廷国立科学技术研究委员会等机构团队2018年6月研究：“围产期暴露于低剂量的GBH会损害雌鼠生殖能力，并导致孙代F2胎儿发育迟缓和先天性结构异常”，但子代没有发现这样的畸形。《自然杂志 - 科学报告》2019年4月发表华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心团队研究：“草甘膦可以诱导疾病和生殖系（如精子）的代际遗传。观察表明，在后代的疾病病因学中必须考虑草甘膦的代际毒理学”。
8-1 《毒理学档案》2018年6月发表阿根廷国立科学技术研究委员会（CONICET）、阿根廷化学残留物和污染物的研究和分析计划（PRINARC）、阿根廷圣菲化学工程学院（UNL）María M. Milesiet al.《围产期接触草甘膦除草剂会损害在Wistar大鼠中雌性生殖结果并诱发第二代不良反应》【证据28】
本研究中使用的草甘膦制剂是由Grupo Agros S.R.L.在阿根廷销售的MAGNUM SUPER II。 它是一种液态水溶性制剂，含有66.2％的草甘膦钾盐（相当于54％w / v的草甘膦酸）作为其活性成分，助剂和惰性成分。选择该GBH是基于以下事实：它是我国最常用的除草剂之一，并且它代表了高草甘膦含量的配方，可防止难以根除的杂草。
怀孕大鼠F0（母代）从妊娠第9天到断奶为止期间每天通过食物接受草甘膦除草剂（GBH），低剂量组（GBH-LD）剂量为2毫克/kg体重，高剂量组（GBH-HD）为200毫克/kg体重。
表1. 连续三天（食物替代期）膳食基质中的草甘膦浓度（mg/kg)：
低浓度组（GBH-LD）: 第1天：21±1；第2天：22±1；第3天：20±1。
高浓度组（GBH-HD）第1天：2688±77；第2天：2699±103；第3天：2540±53。
哺乳期结束时（LD21），怀孕F0（母代）雌鼠中的草甘膦平均血清浓度为：低浓度组（GBH-LD）为0.039±0.006 mg / L，高浓度组（GBH-HD）为3.8±1.2 mg / L。 同样，值得注意的是，在比较来自高浓度组与低浓度组的怀孕F0（母代）雌鼠血清中草甘膦浓度时，观察到了100倍的差异。...
GBH暴露既不会改变F1（子代）的体重增加，也不会改变其阴道开放性。尽管所有暴露于GBH的F1（子代）雌鼠都已怀孕，但可以检测到较少的植入位点（IS）。
两个GBH组的F2孙代均显示出生长延迟，这是由胎儿体重和身长的降低证明的，这与更多胎龄胎儿体小有关。此外，在高剂量组（GBH-HD）怀孕鼠的F2（孙代）后代中发现更高的胎盘重量和胎盘指数。
围产期草甘膦除草剂（GBH）暴露的F1（子代）雌性在GD19的生殖性能：
... 在暴露于低浓度组与高浓度组的一些F1（子代）雌鼠中发现了特殊效果，这些雌鼠表现出单侧怀孕。实际上，低浓度组（GBH-LD）的20只大鼠中有2只，高浓度组（GBHHD）的20只大鼠中有3只，即使没有怀孕的卵巢中的黄体（CL）数目，胚胎植入也只发生在一个子宫角中，尽管未植入的子宫角正常。但是，这些发现并未显示出统计学上的显着性（图3e-GBH-HD）。
我们检测到暴露于两种剂量草甘膦除草剂（GBH）的F1（子代）雌性中的F2（孙代）胎儿（胎儿/窝：对照组，n = 213/20； GBH2，n = 152/15； GBH200，n = 117/13）显示出身长和身体均减少重量（表4）。
图4显示了这样变化的图像。
令人惊讶的是，在高剂量组（GBH-HD）的F2（孙代）后代中发现了结构性先天性异常（胎儿连体和四肢发育异常）。
总之，围产期暴露于低剂量的GBH会损害雌鼠生殖能力，并导致F2（孙代）胎儿发育迟缓和先天性结构异常。
María M. Milesiet al., Perinatal exposure to a glyphosate-based herbicide impairs female reproductive outcomes and induces second-generation adverse effects in Wistar rats.
Archives of Toxicology. June 2018;vol 92, pp2629–2643
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00204-018-2236-6
8-2 《自然杂志 - 科学报告》2019年4月发表华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心团队《草甘膦诱发病理学及精子表观突变表观遗传的评估：跨代毒理学》【证据29】
目前的研究中，对F0代（研究中最初代）雌性大鼠仅短暂暴露，发现（试验剂量）草甘膦对直接暴露的F0代或F1代（子辈）病理的影响可以忽略不计。与此相反，观察到F2代（孙辈）后代和F3代（曾孙辈）病理急剧增加。观察到的跨代病理包括前列腺疾病、肥胖、肾脏疾病、卵巢疾病和分娩（出生）异常。F1代（子辈）、F2代（孙辈）和F3代（曾孙辈）精子表观遗传分析鉴别到差异DNA甲基化区（DMRs）。许多DMR相关基因已被确认并已被证实与病理有关。...
因此，我们认为草甘膦可以诱导疾病和生殖系（如精子）的代际遗传。观察表明，在后代的疾病病因学中必须考虑草甘膦的代际毒理学。
以前的一些环境毒物的研究已经被证明可以导致代际遗传的病理、疾病和精子表观遗传的改变。这包括杀菌剂vinclozolin（烯菌酮、免克宁、灰霉利）[36, 37, 38]，塑料衍生化合物（双酚A和邻苯二甲酸酯）[39]、农药氯菊酯[40]、二氯二苯三氯乙烷（DDT）和甲氧氯[41, 42]、碳氢化合物（飞机燃料JP8）[43]、二恶英[44]，和除草剂阿特拉津（莠去津）[45]。
讨论
草甘膦是全世界最常用的农药，主要用于玉米、大豆和油菜籽中，... 尽管有许多关于草甘膦潜在毒性的报道[12,13]，但监管机构则建议直接接触具有最小的毒性或没有毒性[10,11]。
最近的一项研究表明，草甘膦可导致暴露的大鼠的后代雌性生殖异常[27]。本研究提供了草甘膦对哺乳动物潜在的跨代影响的首次分析。妊娠期雌性动物的暴露同时直接暴露了F0（母代）雌性，F1（子代）后代以及F1（孙代）后代内的种系，这些种系将产生F2（孙代）的后代[45]。 因此，头一个跨代是没有直接暴露的F3（曾孙代）后代[55]，图7。...
环境暴露对后代的影响可称为“跨代遗传毒理学”，表明祖先暴露可促进后代疾病和病理的发作。涉及的机制是通过种系的表观遗传改变进行表观遗传的跨代遗传。尽管许多暴露都可以影响直接暴露的个体以及跨代个体，但最近的观察表明，某些有毒物质或暴露对直接暴露的个体的影响可忽略不计，但可以影响从未直接暴露的后代。
例如，最近的一项关于除草剂阿特拉津（莠去津）的研究发现，对直接暴露的F0（母代），F1（子代）或F2（孙代）代的影响可忽略不计，但跨代F3（曾孙代）代的病态却增加了[45]。因此，对阿特拉津（莠去津）的经典毒理学分析表明直接暴露的风险微乎其微或低，因此该化合物的相对安全性，因为未考虑“遗传毒理学”。本研究对草甘膦可能具有类似的跨代作用的可能性进行了调查。
对草甘膦的直接作用分析表明，从产仔数、性别比或生育力的影响进行考虑，对F0（母代），F1（子代），F2（孙代）或F3（曾孙代）代没有明显的毒性 ... F1（子代）后代在所分析的任何组织中的病理学都可以忽略不计。观察到的唯一影响是对雄性和雌性断奶时体重的影响，以及对雄性青春期延迟的影响。因此，对F0（母代）和F1（子代）代的经典毒理学分析表明，直接接触草甘膦导致的毒性或病理学可忽略不计。与此相反，源自直接暴露造成F1（子代）种系[29]的F2（孙代）后代雄性的睾丸疾病、肾脏疾病、肥胖症和多种疾病中显着增加（图1）。
F2（孙代）雌性的卵巢疾病、肥胖、乳腺肿瘤、分娩异常和多种疾病易感性也显着增加（图2）。
跨代F3（曾孙代）后代雄性的前列腺疾病、肥胖和单一疾病发生率增加，而雌性的卵巢疾病、肾脏疾病、分娩异常和多种疾病易感性增加，图1和2。
... 此外，在F2（孙代）和F3（曾孙代）雄性和雌性鼠中观察到的肥胖率明显更高，这与过去几代中观察到的人类肥胖症急剧增加相关。
草甘膦跨代遗传诱导的许多病理学频率与当今人群的病理学频率相似，例如确定的40％肥胖症率。与在F0（母代）和F1（子代）代中观察到的病理学和疾病忽略不计相比，在F2（孙代）代和跨代F3（曾孙代）代雄性和雌性中观察到了显着的病理学。 因此，基于草甘膦暴露，跨代遗传疾病和精子表观遗传学改变的关联，我们提出草甘膦促进疾病的表观遗传跨代遗传。
Deepika Kubsad, Michael K. Skinneret al., Assessment of Glyphosate Induced Epigenetic Transgenerational Inheritance of Pathologies and Sperm Epimutations: Generational Toxicology. Nature - Scientific Reports, April 2019; Vol.9, Article No.6372
红歌会网 SZHGH.COM
